单克隆抗体间接免疫荧光检测猪瘟病毒方法的建立

以作者制备的抗猪瘟病毒单克隆抗体(anti-CSFV McAb)为一抗、荧光素标记羊抗小鼠IgG为二抗,通过反应条件的优化,建立检测猪瘟病毒抗原的间接免疫荧光(IFA)检测方法。确定IFA最佳工作条件:CSFV最佳接种浓度和培养条件为CSFV 10-3倍稀释后接种PK15细胞,37℃5%CO2恒温箱中培养36 h;McAb最适工作浓度为1∶1 000倍稀释;荧光素标记的羊抗小鼠IgG荧光抗体的最适工作浓度为1∶50倍稀释。特异性试验表明,用建立的IFA检测方法检测CSFV感染PK15细胞为阳性,而检测伪狂犬病病毒(PRV)、猪细小病毒(PPV)、猪2型圆环病毒(PCV-2)感染PK15细胞均为阴性。结果表明,建立的检测细胞培养中CSFV抗原的IFA检测方法具有敏感特异、简便快速等优点,可用于CSFV感染的实验室诊断及CSFV在感染细胞中的定位和动态分布研究。     

北京地区规模化奶牛场牛病毒性腹泻病血清学调查

对北京郊区6个未进行牛病毒性腹泻病（BVD）免疫牛场的546份奶牛血清样品,使用牛病毒性腹泻抗体ELISA试剂盒进行检测,并对其中3个牛群进行牛病毒性腹泻病毒（BVDV）血清抗原筛查。共检出阳性血清514份,总阳性率94.1%,其中5个牛场的场内血清抗体阳性率在95%以上。牛病毒性腹泻持续性感染牛（PI牛）筛查的3个牛群均有阳性牛检出。结果表明,北京地区规模化奶牛场存在牛病毒性腹泻感染和接触史,应采取净化措施进行控制。     

Outbreak of Brucellosis in Domestic Elk in Korea

Seven of 18 elk on a deer farm were found by the official Rose‐Bengal agglutination test (RBT) and tube agglutination test to be brucellosis reactors/suspects. Evaluation with the competitive ELISA (C‐ELISA) and the fluorescence polarization assay (FPA) tests revealed that six and five sera were positive respectively. The seven reactors/ suspects were slaughtered and their blood and tissues were collected. Brucella species could be isolated from three of the slaughtered animals, with nine isolates being obtained from the popliteal, supramammary and submandibular lymph nodes, vaginal discharge, mammary tissue and spleen. Brucella genus‐specific PCR based on 16S rRNA and AMOS‐PCR, which is specific for differential Brucella species, revealed that all nine isolates were Brucella abortus. These nine were further confirmed to be B. abortus biovar 1 by classical biotyping scheme assays. This is the first report of an outbreak of brucellosis in domestic elk in Korea. Our observations suggest that deer should be included in the routine Brucella surveillance programme for the effective control and prevention of brucellosis in Korea.     

抑制素质粒(pCISI)DNA卵黄抗体的制备

抑制素是一种性腺糖蛋白,是由α、β亚基组成的二聚体,在卵巢局部起着旁分泌、自分泌的调节作用,调节卵泡的发育和类固醇激素的发生,主要作用是抑制卵泡刺激素(FSH)[1-4]在垂体的分泌与合成.     

转Bt基因棉不同品种杀虫蛋白季节性表达及其对棉铃虫的控制作用

实验室条件下研究了不同品种转Bt基因棉花对棉铃虫抗性的差异、不同生育期棉花抗虫性的变化及Bt毒蛋白季节性表达。结果显示,不同品种转Bt基因棉在不同发育阶段,其棉叶均有阻止棉铃虫取食的作用,表现了明显的抗性,但其抗性强弱存在明显差异。DP 99B抗性表现最好,Hanza154抗性相对较差,6 d平均校正死亡率分别为89.23%和75.91%。转基因棉不同品种对棉铃虫的抗性在时间上呈现动态变化,以植株发育阶段划分,表现为蕾期盛花期花铃期铃期。ELISA测定结果表明,Bt毒蛋白在转基因棉不同器官中的含量差异显著,叶片中Bt毒蛋白的表达量显著大于其它组织器官。随着棉花生长发育的推进,叶片(鲜重)中Bt毒蛋白含量则明显降低,表现为七叶期三叶期蕾期铃期花铃期。     

樱桃病毒A北京分离物外壳蛋白的原核表达及抗血清制备

根据前期研究获得的樱桃病毒A北京分离物(Cherry virus Aisolate Beijing,CVA-BJ)外壳蛋白基因序列设计引物,将此基因克隆到原核表达载体pET-28a后转化大肠杆菌BL21(DE3),以终浓度为1 mmol/L的IPTG进行诱导表达。Ni珠吸附法纯化表达产物后免疫家兔制备抗血清。间接ELISA测得抗血清效价为1∶2048。以纯化后的蛋白和樱桃叶片总蛋白为检测材料,Western blot分析表明抗血清具有高度特异性。间接ELISA方法检测樱桃病叶,结果呈阳性,与RT-PCR检测结果一致。表明制备的抗血清可用于感病樱桃样品中CVA的检测。     

烟草病毒检测技术研究进展

近年来烟草病毒病发生病普遍,且日趋严重,对烟草的产量及质量影响很大,使烟草行业蒙受巨大损失。鉴于此,建立有效的病毒检测技术,对烟草病毒进行防治十分重要。综述了国内外对烟草病毒的检测技术,主要包括:指示植物法、电镜检测方法、血清学方法、分子生物学方法等。     

口蹄疫病毒结构蛋白VP1上B细胞表位的筛选鉴定

以口蹄疫病毒株AF72 RNA为模板,反转录并扩增结构蛋白VP1基因,PCR纯化产物与pGEM-T easy载体连接并转化JM109菌株,对经凝胶电泳、PCR和EcoRⅠ酶切法鉴定为阳性的重组质粒进行测序,通过序列比对获得AF72 VP1的核苷酸序列和推导氨基酸序列,综合分析结构蛋白VP1的亲水性、可塑性、抗原指数以及表面可能性等参数,预测其潜在B细胞抗原表位并人工合成表位肽段,利用间接ELISA对潜在表位肽段进行筛选鉴定,结果显示,表位VP1a和VP1d为病毒株AF72结构蛋白VP1的优势B细胞表位,该结果为进一步的FMDV多表位疫苗研究提供有价值的参考依据.     

种猪场猪伪狂犬病的净化试验

通过对广西省某种猪场4447头基础公、母猪,进行猪伪狂犬病的清除净化。详细介绍清除净化措施的方法,步骤和清除结果,为有效清除猪群内猪伪狂犬病的显性及隐性感染猪,提高猪群的健康水平,保障种猪的质量,提供了较好的控制方法。     

牛奶中土霉素残留的ELISA检测

间接竞争ELIS法分析了自制抗土霉素抗体的灵敏度与特异性。结果表明,所得抗体的灵敏度和特异性都较好,和其它结构相似或相近物质的交叉反应率较低。以自制抗体建立的间接竞争ELISA法对牛奶中土霉素的残留量进行了检测,所建立的间接竞争ELISA方法对土霉素的检测范围为5~200 ng.mL-1,相关系数r=0.9951。